肝細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。

 

　　今天小編要與大家分享的是肝細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒的操作步驟：

 

　　1、標(biāo)本的采集及保存：

 

　?。?）血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃經(jīng)過一夜夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

　?。?）血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

　　（3）細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

　?。?）樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10，000倍。

 

　　2、試劑的準(zhǔn)備：

 

　　按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑，胰島素elisa試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的，自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正，從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。

 

　　3、加樣：

 

　　分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

 

　　4、溫育：

 

　　用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 

　　5、洗滌：

 

　　小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

 

　　6、顯色：

 

　　每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

 

　　7、測定：

 

　　以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。